變態反應性疾病是機體對或多種物質不耐受而發生的病理性免疫應答，在最近的20～30年內，世界範圍內的發病率都有逐年增加的趨勢，在英國每年過敏性哮喘的患兒增加5％。疾病的範圍涉及到面板科、耳鼻喉科、呼吸內科、消化科及兒科等，對人類健康造成了不同程度的危害，嚴重者甚至可導致生命危險。現已確認有300多種抗原可引起過敏性疾病[1]，變應原的識別，是變應性疾病診斷、特異性免疫治療及預防進一步暴露於過敏原的關鍵。現國內的過敏原檢測方法及試劑繁多，使檢測結果有較大差異,給臨床的診斷和治療帶來了一定的混亂。然而本文重點對變應原檢測的方法、結果的分析、存在的問題及對治療的指導加以綜述，為臨床標準化工作提供參考。
1、體內試驗
變態反應性疾病為IgE介導的Ⅰ型速發變態反應，變應原檢測可體內和體外兩種方法。體內試驗可以顯示由肥大細胞脫顆粒引起的面板及黏膜反應。國內常用的變應原點刺液及皮試液主要有：由北京協和醫院變態反應科實驗室提供的提純液，由德國AllergoPharma公司及丹麥ALK公司提供的標準化試劑。不同的產品原理相同，操作方法大致相同，結果判斷相似，但因其含變應原的濃度不同，所得結果不盡相同。
1.1面板試驗(skin test)
1.1.1 方法及結果 面板點刺試驗(skin prick test, SPT)以德國AllergoPharma公司的標準化點刺液為例。方法：變應原點刺液滴到前臂掌側面板，將點刺針垂直通過滴在面板的試液刺入面板，10～20min後讀試驗結果，含0.4％苯酚生理鹽水作陰性對照，含0.4％苯酚的0.1％組胺溶液作陽性對照。結果判斷如下:出現淡黃色皮丘，其周圍有紅斑，為陽性反應。皮丘大於組胺為++++，皮丘等於組胺為+++，皮丘小於組胺為++或+，與生理鹽水相同為陰性。皮內注射試驗(intradermal test, IT)以德國AllergoPharma公司的標準化皮試液為例。方法:將皮試液0.01～0.05ml注射到上臂外側或後背皮內，10～20min後讀試驗結果。對照、變應原皮試液提供單位及結果判斷同上。
1.1.2臨床應用 面板試驗應用於臨床工作已有百餘年的歷史，可用於變應性鼻炎、溼疹、過敏性哮喘等變應性疾病的診斷及特異性免疫治療前，特異性高，假陽性率低，簡單、準確、經濟。面板點刺試驗因其安全，易於操作,靈敏度高，臨床相關性好，痛苦小、副作用小，適合於兒童及高度敏感的，歐洲變態反應和臨床免疫學協會(EAACI)推薦其為最佳體內診斷方法[2]。禁忌證：有青黴素皮試過敏性休克史者;明顯損害全身狀態的疾病;試驗部位有面板病變的疾病;接受β阻滯劑或ACE抑制劑的患者;腎上腺素過敏的患者;妊娠;5歲以下。相對禁忌證：服用抗組胺藥在藥物3半衰期內;有可能的話，儘量在少症狀的時候進行診斷。併發症：區域性皮疹、面板壞死;極罕見全身嚴重副反應，如過敏性休克、喉水腫等。在檢測開始前，一定要詳細詢問病史，檢測要在有經驗及具備搶救能力和裝置的醫院進行。
1.2特異性激發試驗(specific provocation test)是模擬自然發病條件、以少量致敏原引起一次較輕的變態反應發作、用以確定變應原的試驗。根據患者發病部位的不同，可以進行不同器官的激發試驗。
1.2.1方法及結果支氣管激發試驗：試驗前先測第一秒用力呼氣量(FEV-1)和肺活量;吸入對照液或抗原液，吸入後15～20min複查FEV-1。結果判定陽性結果的判定標準如下：(1)明顯自覺症狀，如胸部緊迫感和喘息等;(2)肺部聞及哮鳴音;(3)FEV-1下降20％以上。鼻黏膜激發試驗可經抗原吸入法(粉劑)或滴入法(液體)進行，接觸抗原15～20min後出現黏膜水腫和蒼白，病人出現鼻癢、流涕、噴嚏等症狀可即判為陽性反應。結膜激發試驗將適當濃度的變應原浸液滴入患者一側眼結膜，另一側滴入生理鹽水作對照;15～20min觀察結果。試驗側結膜充血、水腫、分泌增加、癢感，甚至出現眼瞼紅腫等現象者為陽性反應。
1.2.2臨床應用：激發試驗檢測的適應證為臨床高度懷疑為變應性疾病，而面板試驗及體外試驗為陰性的患者;多種過敏原過敏，尋找責任過敏原;過敏性哮喘患者免疫治療前瞭解其耐受性等。對食物過敏的患者為診斷的金標準。激發試驗較面板試驗的特異性高，與患者的病史、症狀和過敏原吸附試驗的相關性較強。此試驗有引起嚴重的哮喘急性發作或過敏性休克等嚴重併發症的潛在危險，所用抗原濃度不宜過高，應該由小到大遞增;試驗前必須做好系列搶救準備。
1.3特異性斑貼試驗(atopic patch test, APT)
1.3.1方法及結果
以瑞典化學診斷AB公司的歐洲標準變應原的試器及斑貼試驗為例。將變應原適量分別置於斑試器小室內,液體變應原則先在斑試器內放一濾紙片,然後滴加變應原。將加好變應原的斑試膠帶貼敷於患者背部肩胛下方無皮損處面板,並標記,囑患者3
天內禁止劇烈活動。48h 後去除斑試物並觀察記錄，72h再次進行觀察，判定結果[3]。判讀標準以國際接觸性皮炎研究組推薦的標準為依據[4] 。
1.3.2臨床應用
臨床上主要用於診斷接觸性皮炎，使用方便,結果準確。斑貼試驗的靈敏度為97.8％,特異度為76.9％,準確性為90.3％,陽性預測值為88.2％,陰性預測值為95.2％。相對禁忌證：面板有廣泛病變者。副反應輕微，有皮疹及瘙癢的報道[3]。
2、體外試驗
體外試驗為免疫化學測定，一般是檢測血清中的sIgE。適應證為：(1)面板病變廣泛，無法行皮試;(2)有抗原誘發嚴重過敏反應史，體內試驗有一定危險者;(3)服用抗組胺藥後面板反應受抑制，皮試結果不準確;(4)該抗原不能作皮試，如化工原料等[2];(5)面板試驗結果與臨床病史不符，需要進一步分析驗證;(6)特異性免疫治療前，明確責任過敏原。體外試驗安全無副反應及禁忌證。國內已出現多種檢測系統，以下就不同的原理分述之。
2.1放射性變應原吸附試驗(radio allergo sorbent test, RAST)
2.1.1檢測原理及結果 以瑞典Pharmacia 公司生產的Uni- CAP 系統最有代表性，它的基本原理是將變應原吸附在一種稱作immuno CAP的新型固體上，後者是裝在小膠囊中的親水性載體聚合物，由活化的纖維素衍生物合成，與變應原有極高的結合能力。每個固相載體CAP均包被了不同的變應原，如患者血清中有針對該變應原的IgE，即可與變應原特異性結合，再加入酶標記的兔抗人抗IgE血清(酶標二抗)，即可形成固相載體―變應原―IgE―酶標二抗的複合物，經過洗滌及加入基質，最後加入發展液，發出熒光，根據熒光吸光度換算IgE含量，待測血清的熒光吸光度大於參考品為陽性，小於參考品為陰性，主要操作程式由儀器自動完成，並由儀器自動打印出結果[5]。
按照WHO制定的檢測sIgE的75P502標準進行定量,結果判定如下: <0.35KUPL為0級;0.35～0.7KUPL為1級;0.7～3.5KUPL為2級;3.5～17.5KUPL為3級;17.5～50.0KUPL為4級;50.0～100.0KUPL為5級; >100.0KUPL為6級[2]。
2.1.2系統特點：CAP系統具有優良的反應條件和較短的擴散距離，其結果具有高靈敏度、高特異性，陽性預計值達95％以上。致敏原的皮試與CAP結果間符合率高,達86.2％～96.6％;二者的相關性好,等級相關係數在0.661～0.957之間[5]。一種過敏原一個反應帽，臨床選擇餘地大，可多可少，任意組合，避免了不必要的浪費。抽血量少，痛苦小。
2.2酶聯免疫法(ELISA)
2.2.1檢測原理及結果：以美國ASI公司過敏原體外檢測試劑盒為例，它的基本原理是：當具有過敏抗原固化於表面的載體與病人血清培養在一起後，血清中特異性IgE就會特異地結合到抗原上，此特異結合的抗體可被酶聯的二抗所識別，加入顯色劑後，二抗所聯的酶使顯色劑由橘黃色變為藍色。顯色的深度與血清中特異性IgE成正比;能定性/半定量地檢測血清中特異性IgE的濃度。結果判定：根據顯色的不同，可鑑定為5個等級(0～4級)。
2.3免疫印跡法
2.3.1檢測原理及結果：以德國MEDIWISS公司生產的AlleryScreen過敏原檢測系統為例。特異性過敏原被吸附於硝酸纖維素膜表面，加入患者血清後孵育，標本中的特異性IgE與過敏原發生反應，結合到硝酸纖維素膜上。加入鹼性磷酸酶標記的鏈酶親和素，與生物素結合。加入BCIP/NBT酶作用底物孵育後，發生特定底酶顯色反應，試劑條上出現沉澱。顏色的深淺與血清中sIgE抗體含量成正比，待試劑條幹燥後，由專用過敏原監測儀檢測，讀取定量檢測結果。
2.3.2系統特點：其他方法是將過敏原共價修飾結合於固相物，而此係統中濃縮的過敏原是未經任何修飾地連線到硝酸纖維素膜上，並且使用了生物素-親和素放大系統，使得及微量的IgE亦可被檢測。AlleryScreen系統有極好的敏感度，與CAP系統相似，但與皮試相比略低。在一個標本內檢測可到20種抗原，僅需250μl血清，可以作為臨床過篩試驗。
3、變應原臨床檢測的選擇及診斷
變態反應性疾病的變應原診斷是一個綜合過程，包括明確的臨床病史(過敏原吸入過敏史、接觸過敏史及食物過敏史)，面板試驗，特異性激發試驗及血清特異性IgE的檢測等。
面板點刺試驗因其簡單、經濟、安全，為首選檢查。面板試驗與病史相符時，可以明確診斷。分析面板試驗結果必須結合病史，面板試驗陽性，與病史相符，則提示其為疾病的致敏原;相反，病史陰性，皮試也陰性，基本可認為該變應原與本病無關[2]。面板試驗診斷多種過敏原過敏，應作血清IgE及激發試驗明確責任過敏原。面板試驗與病史不相符時，應進一步做血清IgE及激發試驗以綜合分析。
血清特異性IgE檢測，可作為面板試驗有禁忌證、面板試驗與病史不符、面板試驗診斷為多種過敏原過敏的患者。有多種過敏原過敏的患者，面板試驗及血清特異性IgE分級都高的變應原可考慮為責任變應原。
規範的激發試驗是最可靠的特異性診斷方法，尤其對於食物過敏的患者，因食物過敏原的面板試驗和特異性IgE檢測結果準確性差，隨機雙盲的食物激發試驗是診斷食物過敏的金標準。激發試驗因其有誘發嚴重過敏反應的可能，不能作為臨床常規的檢查方法。當面板試驗及血清特異性IgE均為陰性，臨床有明確過敏原接觸過敏史，有確診必要性時;當已確診多種過敏原過敏，不能確定責任過敏原時;過敏性哮喘患者在特異性免疫治療前，為評估治療耐受性時，可做激發試驗。激發試驗只有在非常必要時進行，患者知情同意，有搶救措施及能力，出現副反應及時救治。在疾病發作期不宜進行激發試驗。
總之，過敏原的診斷需要有經驗的醫生根據病史和檢查做出全面、正確的評估。
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