摘要：目的：探討利用血清蛋白指紋圖譜篩選乳腺癌血清標記物對乳腺癌臨床診斷的價值和意義。方法：利用美國蛋白晶片系統PBSII/C型包括蛋白指紋圖譜儀和蛋白質晶片檢測42例乳腺癌患者血清蛋白質的相對含量，同時以42例正常人血清作對照。結果：在乳腺癌患者和正常人患者中共發現三個表達峰有統計學差異的蛋白質，其質荷比分別為4800Da、6410Da和9300Da，其靈敏性89.3％、特異性92.7％，顯示這三個血清標記物對乳腺癌診斷診斷效果明顯。結論：血清蛋白指紋圖譜技術在篩選乳腺癌血清標記物的資料可靠，能夠應用於乳腺癌的生物學診斷中來，應該加以推廣。
蛋白指紋圖譜是一種基於質譜技術的蛋白質分析技術，在這種方法中，興趣蛋白被裂解成小肽段，通過質譜儀如基質輔助鐳射解析電離飛行時間質譜(MALDL-TOF-MS)或電噴霧飛行時間質譜(EST-TOF-MS)進行精確的分析。許多研究顯示，將蛋白指紋圖譜技術應用到臨床診斷上來是有效的，尤其是腫瘤標誌物的篩查上。乳腺癌已經成為婦女死亡的重要原因之一，其早期診斷對於乳腺癌的控制意義重大[1]。本研究旨在探討利用血清蛋白指紋圖譜篩選乳腺癌血清標記物對乳腺癌臨床診斷的價值和意義，現將研究結果彙報如下：
1、一般資料
1.1研究物件
總結了自2009年6月以來我院接診的乳腺癌患者30例(已經經過手術和病理確診)，年齡在34-76歲，平均年齡51歲;體重46kg-77kg，平均54.6kg;其中I期7例，
II期9例，IIIa期7例IIIb期3例，IV期2例。同時選取30例正常人作為對照。正常人在年齡、體重等指標和患者相比均不具統計學差異。
1.2實驗材料與裝置
高效液相色譜儀使用購買自美國安捷倫公司，型號為Agilent 1200型。Tris-HCL、醋酸鈉、鹽酸、10×PBS Buffer、尿素、三氟乙酸、氫氧化鈉和其他試劑均購買自Sigma公司。質控晶片all in one peptide和all in one protein各一根，蛋白質晶片和表面增強鐳射解析電離-飛行時間-質譜( SELDI-TOF MS)均購買自美國Cipher-gen公司。
1.3方法
1.3.1蛋白質晶片處理 將晶片插入生物晶片處理器，每孔加入200微升結合緩衝液，置振盪器500r/min震盪5min，棄上清[2]。重複以上操作一次。
1.3.21上樣 在晶片處理器每孔中加入100ul預備樣品， 4℃ 下500r/min震盪1小時。棄樣品後，晶片每孔加入200ul緩衝液，室溫置振盪器500r/min震盪5min，棄上清，再次加入緩衝液200ul，重複操作1次[3]。棄緩衝液，每孔加入200ul去離子水後立刻甩出，共洗3次。迅速拆開晶片處理器，取出晶片，待表面乾燥後每孔滴加0.8SPA緩衝液，常溫烘乾。
1.4統計學處理
用BiomakerWizard3.1軟體和SPSS13對乳腺癌患者和正常人血清峰值表現差異的蛋白質資料作分析，篩選出差異有統計學意義的蛋白質峰[4]。結合各個峰的權重，比較不同蛋白質峰排列組合的判別分析結果，選出最佳組合，建立乳腺癌的蛋白指紋圖譜診斷模型。
2、結果
在乳腺癌患者和正常人患者中共發現三個表達峰有統計學差異的蛋白質，其質荷比分別為4800Da、6410Da和9300Da，其靈敏性89.3％、特異性92.7％，顯示這三個血清標記物對乳腺癌診斷診斷效果明顯。
3、討論
在我國，乳腺癌是女性最經常發生的惡性腫瘤也是女性死亡的第二大原因，據統計佔到女性腫瘤的31％。乳腺癌的早期檢測將大大有助於癌症的控制，從而在癌症轉移前促進乳腺癌浸潤狀態時的診斷和治療的。已經有研究顯示一些血清蛋白標記物在乳腺腫瘤的診斷中具有極高的價值。美國食品和藥物監督管理局通過了腫瘤標誌物如CA15.3和CA27.29，建議將這兩項標誌物僅用於監測晚期乳腺癌治療或復發。可以單獨使用或與現有的標誌物聯合使用的生物標誌物在乳腺癌的篩查中的需要仍然很迫切。
蛋白指紋圖譜技術不同於只能單一指標分析的傳統腫瘤標誌物，通過對蛋白質動態、全景的分析，將病人疾病早期最微小基因表達產物(蛋白質或多肽)系統地分析，獲得待檢標本中各種蛋白的含量和蛋白質分子量等資訊，繪製成蛋白指紋圖譜(EPG)，通過計算機軟體與正常人、亞健康狀態人群、良性疾病和癌症病人的指紋圖譜庫對照，比較分析差異，就能快速、敏感和特異地發現和捕獲新的與疾病相關的蛋白。
本研究旨在探討利用血清蛋白指紋圖譜篩選乳腺癌血清標記物對乳腺癌臨床診斷的價值和意義。通過蛋白質晶片結果發現在乳腺癌患者和正常人患者中共發現三個表達峰有統計學差異的蛋白質，其質荷比分別為4800Da、6410Da和9300Da，其靈敏性89.3％、特異性92.7％，顯示血清蛋白指紋圖譜技術在篩選乳腺癌血清標記物的資料可靠，能夠應用於乳腺癌的生物學診斷中來，應該加以推廣。
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