以氰化高鐵血紅蛋白為底物測定NADH-MetHb還原酶活性，或以二氯酚靛酚為底物測定黃遞酶活性，或以細胞色素b5為底物測定b5R活性。需強調指出的是，由於不同遺傳變異型的作用機制不同，試管中(高底物濃度下)測定的結果並不能確切地反映在活細胞內(低底物濃度下)催化效率減低的程度。因為，如果酶分子結構的改變使其與底物NADH的親和力減低(Km值增大)，在生理情況下，細胞內的NADH濃度很低，酶活性幾乎完全喪失;但在試管中測定酶活力時，加入的NADH相當於生理濃度的幾十倍甚至上百倍，完全可以測出酶的活性。若在低底物濃度下測定酶活性，必須用時間掃描記錄其瞬時初速度，否則誤差太大。其他遺傳性酶缺陷病也都有類似問題。
正常人體內酶活性較穩定，酶活性改變預示著人體某些器官和組織受損或發生疾病後，某些酶被釋放入血、尿或體液內.因此，藉助血、尿或體液內酶的活性測定，可以瞭解或判定某些疾病的發生和發展。
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