梅毒的病程長，症狀複雜，與很多其他疾病表現相像，必須結合病史、體檢及實驗室檢查的結果，進行綜合分析，才能做出診斷。
梅毒的實驗室檢查有：
1、組織與體液中梅毒螺旋體的檢查
(1)暗視野顯微鏡檢查：對早期梅毒的診斷有重要價值，包括硬下疳、二期梅毒的扁平溼疣、口腔黏膜斑等。如果結果陰性，建議連查3日。
(2)免疫熒光染色或直接熒光抗體試驗(DFA tests)
(3)銀染色：顯示內臟和面板損害中的目的螺旋體。
2、梅毒血清試驗
(1)非梅毒螺旋體抗原血清試驗
1)VDRL試驗：除用於血清檢測外，還用於腦脊液檢查，以助神經梅毒的診斷。
2)USR試驗
3)RPR試驗：除血清外還可用血漿做試驗。
(2)梅毒螺旋體抗原血清試驗
1)FTA-ABS試驗：檢測梅毒螺旋體IgG抗體，對一期梅毒，敏感性高於其他梅毒血清試驗，感染後3周即呈陽性。
2)TPHA和TPPA
3) EIA(酶免疫測定):在用於篩查試驗時特異性為99.5％，比RPR試驗高;在檢查以往感染患者時，敏感性比FTA-ABS試驗高。
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