羊膜作為生物材料應用於基礎及臨床已經有多年的歷史。早在20世紀初期就有用含羊膜的胎膜供體移植於燒傷和潰瘍創面的報道,隨後在顱腦外科、腹腔外科、婦產科及眼科均有其應用的報道。隨著生物工程技術、組織工程技術的發展,羊膜的應用更加廣泛,研究更加深入。
1、羊膜結構及功能
正常人羊膜組織結構分為上皮細胞層、基底膜、緻密層、纖維細胞層及海綿層。通常製備好的羊膜只含有上皮細胞層、基底膜和緻密層3層結構,而纖維細胞層、海綿層在製備時被剝離。上皮細胞層含有羊膜上皮細胞和由羊膜上皮細胞分泌的多種生長因子。
2、不同方法制備的羊膜特點
用於基礎和臨床研究的羊膜大致有新鮮羊膜、凍存羊膜和羊膜細胞外基質3種,它們各有特點[6]。
2.1新鮮羊膜
這種羊膜是將新鮮羊膜在無菌條件下洗盡血跡,剝離羊膜,置於4℃冰箱儲存,24h內使用。新鮮羊膜保留了羊膜上皮細胞及細胞因子,用於治療眼表疾病時,對眼表重建有利。但因含有細胞成分,有輕微抗原性,且儲存時間短,使用不方便。
2.2凍存羊膜
取製備好的新鮮羊膜,置於4℃100％甘油中脫水,每24小時換液1次,共3次。儲存於4℃恆溫冰箱中備用。將脫水後的羊膜取出,加入含硫痠軟骨素的100％甘油∶DMEM液(1∶1)中浸泡,-80℃超低溫冰箱儲存,6個月備用。與新鮮羊膜比較,儲存時間長,使用較方便。
2.3羊膜細胞外基質
將經甘油脫水後的羊膜取出,PBS液水化,加入0125％胰蛋白酶,37℃室溫下消化,再用細胞刮子刮除殘存的羊膜上皮細胞,於倒置相差顯微鏡下,證實無細胞後羊膜上皮面朝上平鋪於乙酸纖維薄膜紙上,加入含硫痠軟骨素的100％甘油∶DMEM液(1∶1)中浸泡,置於4℃恆溫冰箱儲存,1周備用,或-80℃超低溫儲存,6個月備用。
有研究者將生理鹽水漂洗後的羊膜用012％戊二醛交聯,015％十二烷基磺酸鈉、0125％胰酶脫細胞,反覆漂洗,冷凍乾燥,分裝密封,環氧乙烷消毒備用[7]。這種材料除去了細胞和可溶性蛋白成分,只保留了原有組織中的不可溶成分,主要包括膠原、彈性蛋白、氨基葡聚糖和結構蛋白等,可作為細胞生長支架,促進細胞黏附,同時儲存時間長,使用方便。
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