類風溼關節炎是臨床常見病。筆者認為RA活動期中醫病機主要是溼熱毒邪痺阻關節，臨床上應用二妙散治療效果顯著。本文利用AA動物模型，觀察二妙散不同配伍的抗炎效應，為其臨床應用以及作用機制提供動物實驗依據。
1、材料與方法
1.1動物及分組 雌性8周齡W istar大鼠90只, 購自山東中醫藥大學實驗動物中心，體重(150±20)g，SPF級，動物許可證號碼：SCXK(魯)20111118。按隨機數字表法分為9組(每組10只)，分別為空白組、模型組、對照組、蒼朮1黃柏1、蒼朮1黃柏2、蒼朮2黃柏1、蒼朮組、黃柏組、黃柏蒼朮單煎合併組，均給予等量蒸餾水，正常飼料餵養。
1.2藥物與試劑 二妙散組成為蒼朮、黃柏。由我院製劑室統一配備，分別調配成生藥濃度為0.64g/mL、0.43g/mL、0.43g/mL、0.32g/mL、0.32g/mL、0.64g/mL的藥液。雷公藤多苷片：黃石飛雲製藥有限公司生產，劑量規格為10mg/片。實驗試劑有完全弗氏佐劑、白細胞介素1(IL-1)、白細胞介素4(IL-4)、白細胞介素6(IL-6)和α腫瘤壞死因子(TNF-α)。
2、造模與給藥
除空白組外，各組大鼠均於右後足趾皮下注射完全弗氏佐劑0.1ml，造模成功的標準是大鼠右後足趾皮紋消失。
造模成功後，空白組不用藥，其他各組大鼠均於造模後第1天給藥，劑量統一規範為2.5mL。詳細如下：模型組每天每隻灌服生理鹽水2.5ml;對照組每天每隻灌服雷公藤多苷片4mg/2.5mL;蒼朮1黃柏1組每天每隻灌服中藥液1.6g/2.5mL;蒼朮1黃柏2組和蒼朮2黃柏1組每天每隻灌服中藥液1.2g/2.5mL;蒼朮組、黃柏組每天每隻灌服中藥液0.8g/2.5mL;單煎合併組每天每隻灌服中藥液1.6g/2.5mL，藥液為蒼朮、黃柏單煎後合併，二者比例為1:1。每天灌服的劑量按照生藥濃度計算所得。
除空白組外，其他大鼠均每日灌胃用藥至實驗結束前一天，共22天。
3、實驗檢測專案
(1)測關節腫脹度 造模當天、造模後每3天用遊標卡尺測量大鼠右下肢足跖中後1/3處厚度，每隻大鼠測量2遍，取均值作為腫脹數值並做記錄。
(2)檢驗血清標本 給藥階段結束後，以2％戊巴比妥鈉以腹腔注射方式麻醉動物，剖腹抽取下腔靜脈血，離心後取血清，取IL-1、IL-4、IL-6、TNF-α試劑盒，分別加樣化驗檢測。
(3)關節病理送檢 每組取2只大鼠，對右膝關節囊進行常規病理切片送檢。
4、實驗結果
(1)各組大鼠的足跖腫脹度
造模當天各組大鼠右後足跖注射部位均出現明顯腫脹。之後在4-7天內，所有造模大鼠的注射部位腫脹程度相繼達到高峰。一週左右時，多數大鼠開始出現左膝關節處腫脹。至兩週時，左膝關節腫脹逐漸傾向穩定。之後隨著灌藥天數的增加，部分大鼠的左膝腫脹程度出現不同程度的緩解，極少數大鼠在切取標本前左膝關節腫脹消失。腫脹詳細數值及用藥後的測量見表1。
表1 對右後足跖腫脹影響(mm)
組別
天數
空白組
模型組
對照組
蒼朮1
黃柏1
蒼朮1
黃柏2
蒼朮2
黃柏1
蒼朮組
黃柏組
單煎合併組
0
3.93±0.27
4.09±0.40
3.85±0.46
4.07±0.58
4.29±0.31
4.43±0.32
4.32±0.16
4.08±0.49
4.36±0.59
1
3.96±0.30
7.38±0..40
7.45±0.46
7.26±0.39
7.29±0.52
7.62±0.47
7.60±0.55
7.57±0.27
7.35±0.15
4
4.02±0.46
7.99±0.65
8.22±0.54
8.02±0.57○
7.96±0.59○
8.15±0.67○
7.88±0.45○
7.74±0.52○
7.92±0.32○
7
3.94±0.33
7.90±0.39
8.31±0.24
7.95±0.55○
8.05±0.49○
8.21±0.67○
7.92±0.60○
7.83±0.48○
7.98±0.45○
10
3.92±0.40
7.87±0.40
8.26±0.30
7.68±0.45○
7.98±0.40○
8.12±0.56○
7..88±0.56○
7.75±0.48○
7.87±0.43○
13
3.95±0.41
7..78±0.42
8.12±0.33
7.49±0.42○
7.76±0.41○
7.98±0.45○
7.72±0.48○
7.62±0.34○
7.62±0.38○
16
3.93±0.35
7.69±0.38
7.98±0.42
7.26±0.35○
7.59±0.39○
7.82±0.40○
7.60±0.36○
7.58±0.43○
7.52±0.33○
19
3.95±0.40
7.60±0.41
7.82±0.35
7.02±0.45○
7.45±0.36○
7.69±0.30○
7.50±0.46○
7.49±0.37○
7.29±0.45○
22
3.94±0.35
7.56±0.42
7.70±0.42
6.80±0.36○
7.36±0.42○
7.59±0.46○
7.41±0.35○
7.38±0.42○
7.12±0.38○
注：經t檢驗分析，所有用藥組與模型組比較，P<0.05，中藥組與對照組比較，○P<0.05。
通過表1可以看出，用藥後，各組大鼠的足跖腫脹均在第2周前後時間出現逐漸緩解，提示中西藥物對大鼠足跖的炎症均有抑制作用，各用藥組與模型組比較均有統計學意義(P<0.05)。同時，二妙散的不同配伍組、單味藥組與對照組比較均有統計學意義(p<0.05)。中藥等量配伍組與其他各組之間也有統計學意義(p<0.05)。可見從緩解關節腫脹的程度而言，蒼朮1黃柏1組治療效果最佳。< span="">
(2)藥物對炎性細胞因子的影響
中、西藥物對大鼠血清炎性細胞因子的影響結果，詳見表2。
表2 藥物對血清炎性細胞因子的影響
細胞因子
組別
IL-1β
IL-4
IL-6
TNF-α
空白組
54.01±13.19
307.04±12.48
59.64±8.39
1.19±0.25
模型組
112.55±10.54
41.36±4.15
68.31±6.72
1.95±0.05
對照組
85.90±13.89○
115.64±12.18
62.03±5.44
1.75±0.09
蒼朮1黃柏1
69.29±10.90○
170.40±10.76○
38.69±8.97□
1.23±0.12○
蒼朮1黃柏2
79.39±1229○
139.09±10.61○
49.60±5.02□
1.42±0.25○
蒼朮2黃柏1
76.64±15.89○
140.26±9.18○
45.88±8.43□
1.47±0.05○
蒼朮組
87.56±9.32
123.66±15.23
46.26±9.33□
1.60±0.38
黃柏組
90.78±13.56
130.55±13.56
51.69±5.43
1.58±0.24
單煎合併組
86.34±12.75
125.36±15.33
56.59±4.29
1.56±0.08
注：經t檢驗分析，所有用藥組與模型組比較，P<0.01;中藥組與對照組比較，○P<0.05，□P<0.01。< span="">
通過表2可以看出，能夠反映炎症嚴重程度的IL-1β、IL-6、TNF-α以模型組最高，反映抑制炎症的細胞因子IL-4以模型組最低，與空白組比較均有統計學意義(P<0.01)。二妙散的不同配伍劑量組與模型組大鼠對血清細胞因子的影響比較有統計學意義(p<0.01)，與對照組比較也有統計學意義(p<0.01)，其中il-1、il-4、tnf-α(p<0.05)，il-6(p<0.01)，充分說明了二妙散不同配伍的療效均較對照組為佳。而< span="">蒼朮1黃柏1組與其他各用藥組比較均有統計學意義(P<0.05)，說明二妙散原方1:1的比例療效最佳。< span="">
(3)藥物對關節病理切片的影響
空白組：所切取的關節腔內偶有較少量的纖維結締組織，偶見慢性炎症細胞，關節囊內無充血、無水腫。
模型組：所切取的關節腔內可見纖維組織明顯增殖，並可見到大量的慢性炎症細胞的浸潤，伴見明顯的肉芽組織，有典型的淋巴濾泡形成，關節囊內充血和水腫均很明顯。(見圖1所示)
各用藥組：所切取的關節腔內病理較模型組均有明顯改變。纖維組織增生較模型組程度為輕，慢性炎症細胞可見數量明顯減少，充血和水腫程度也較模型組明顯緩解。二妙散不同配伍組較對照組、中藥單煎組、單體混合組改善明顯。說明二妙散配伍各組的抗炎療效較好，尤其以原方1:1的比例療效最佳。(見圖2、3、4所示)
其結果見：光鏡下病理切片(如圖1、2、3、4)。
圖1 (模型組×100) 圖2 (對照組×100)
圖3 (蒼朮1黃柏1組×100) 圖4 (蒼朮組×100)
5、討論
RA屬中醫學“熱痺”、“侗浴狽凍搿1靜』疃諢靜』喔讜淌榷荊庖苑紜⒑⑹刃按踴鈧盞賈率榷拘氨宰杈紜⒔盥觥⒐牆冢任饕±硪蛩[1]。
現代醫學發現，IL-1與TNF-α是RA發病過程中起重要作用的細胞因子，除了可以導致滑膜炎症外，還可以導致關節的進行性破壞[2]。有研究表明IL-1、TNFα的降低與臨床活動性(臨床指標及實驗室指標)的改善密切相關[3]。IL-4的抑炎作用主要體現在其調節RA多種不同型別細胞的活性，從而抑制TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8等的活性，抑制NO的合成、PGE2的產生，從而控制炎症發生，保護關節軟骨和關節下骨及其他關節組織的完整性。越來越多的看法認為在細胞與分子水平上抑制致炎因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8等的活性，上調抑炎因子IL-4、IL-10的活性，或許可為治療RA的戰略提供新的線索。
中醫的不傳之祕在於劑量，不同比例的配伍發揮的作用可能差別很大，本研究發現二妙散不同配伍的作用大小不同，蒼朮與黃柏配伍比例1:1時無論對大鼠致炎足趾的消腫效果還是對血清炎性細胞因子的影響效果都是最明顯的，由此可見二妙散中蒼朮黃柏等量配伍意義重大。
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