接種乙型肝炎疫苗是預防HBV感染的最有效方法。乙型肝炎疫苗的接種物件主要是新生兒，其次為嬰幼兒，15歲以下未免疫人群和高危人群 （如醫務人員、經常接觸血液的人員、托幼機構工作人員、器官移植患者、經常接受輸血或血液製品者、免疫功能低下者、易發生外傷者、HBsAg陽性者的家庭成員、男性同性戀或有多個性伴侶和靜脈內注射毒品者等）。乙型肝炎疫苗全程需接種3針，按照0、1、6個月程式，即接種第1針疫苗後，間隔1個月及6個月注射第2及第3針疫苗。新生兒接種乙型肝炎疫苗要求在出生後24 h內接種，越早越好。接種部位新生兒為臀前部外側肌肉內，兒童和成人為上臂三角肌中部肌肉內注射。
單用乙型肝炎疫苗阻斷母嬰傳播的阻斷率為87.8％（Ⅱ-3）。對HBsAg陽性母親的新生兒，應在出生後24 h內儘早（最好在出生後12 h）注射乙型肝炎免疫球蛋白 （HBIG），劑量應≥100 IU，同時在不同部位接種10 μg重組酵母或20μg中國倉鼠卵母細胞 （CHO） 乙型肝炎疫苗，在1個月和6個月時分別接種第2和第3針乙型肝炎疫苗，可顯著提高阻斷母嬰傳播的效果（Ⅱ-3）。也可在出生後12 h內先注射1針HBIG，1個月後再注射第2針HBIG，並同時在不同部位接種一針10 μg重組酵母或20μg CHO乙型肝炎疫苗，間隔1和6個月分別接種第2和第3針乙型肝炎疫苗。新生兒在出生12 h內注射HBIG和乙型肝炎疫苗後，可接受HBsAg陽性母親的哺乳（III）。
對HBsAg陰性母親的新生兒可用5μg或10μg酵母或10μg CHO乙型肝炎疫苗免疫；對新生兒時期未接種乙型肝炎疫苗的兒童應進行補種，劑量為5μg或10μg重組酵母或10μg CHO乙型肝炎疫苗；對成人建議接種20μg酵母或20μg CHO乙型肝炎疫苗。對免疫功能低下或無應答者，應增加疫苗的接種劑量（如60μg）和針次；對3針免疫程式無應答者可再接種3針，並於第2次接種3針乙型肝炎疫苗後1~2個月檢測血清中抗-HBs，如仍無應答，可接種一針60μg重組酵母乙型肝炎疫苗。
接種乙型肝炎疫苗後有抗體應答者的保護效果一般至少可持續12年，因此，一般人群不需要進行抗-HBs監測或加強免疫。但對高危人群可進行抗-HBs監測，如抗-HBs<10 mIU/mL，可給予加強免疫（Ⅲ）。
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