1、精液分析
至少2次以上，間隔2-3個月，按WHO標準作精液檢測。無精子症是指精液液化後標本在離心後將小滴置400倍鏡下仔細查詢多個塗片沒有發現精子。精液量小於1.5毫升、PH酸性、果糖低者首先考慮射精管梗阻或先天性雙側輸精管缺如(CBAVD)。當精液量少時，還應作射精後尿液檢查，以排除逆行射精。精液塗片中找不到精子或非成熟生精細胞，考慮精道的近端或遠端的完全性梗阻。
2、病史詢問
有下列病史容易導致梗阻：血精，射精後疼痛，既往或現在的尿道炎、前列腺炎尿路梗阻或刺激症狀;既往陰囊增大、疼痛、手術；既往腹股溝血腫、外傷;慢性肺部感染。
3、體格檢查
梗阻性無精子症的體徵：
A.至少一個睪丸體積大於12毫升以上(伴有生精部分功能衰竭的梗阻性無精子症的睪丸體積較小)
B.附睪大而硬
C.附睪或輸精管結節
D.輸精管缺如或部分閉鎖
E.尿道炎體
F.前列腺異常
4、超聲檢查
陰囊超聲對有些梗阻體徵的發現有幫助(如睪丸網擴張、附睪囊腫、輸精管缺如)，同時能排除睪丸發育不良，對精液量少或懷疑遠端梗阻的患者必須經尿道B超檢查。
5、抑制素B
抑制素B是由生殖系統細胞分泌產生，與生殖能力有密切關係，對生殖功能具有內分泌、旁分泌和自分泌的調節作用。生精阻滯男性血清抑制素B水平顯著低於正常生精功能男性，抑制素B水平反映了整個睪丸組織的功能，是輸精管道的直接產物，可用於區分梗阻性與非梗阻性無精子症患者。
6、α-葡萄糖苷酶
精液中的α-葡萄糖苷酶主要由附睪上皮細胞分泌，是附睪的特異性酶和標記酶，可催化蛋白質的糖類組成部分或低聚糖的分解，為精子成熟提供適宜的能量，該酶可作為附睪的功能性指標。當輸精管結紮後，該酶活力顯著降低。測該酶對鑑別輸精管阻塞和睪丸生精障礙所致的無精症有一定意義。
7、內分泌六項
男性不育症患者比正常正常人更容易出現內分泌異常。通常需要檢測卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、泌乳素(PRL)、雌二醇(E2)、總體睪酮(TT)及遊離睪酮(FT)，即性激素六項。對於無精症和極度少弱畸形精子綜合徵(OAT)的患者，內分泌檢查對於區別梗阻性因素或非梗阻性因素，具有較大的臨床意義，梗阻性無精子症患者性激素水平大多正常。血清抑制素B及FSH的聯合檢測可以提高患者生精功能評估的準確性。
8、侵襲性診斷
睪丸活檢、陰囊探查、遠端精道評估可用於懷疑有後天性因素造成精道梗阻的無精子症患者，但探查和復通手術應同時進行。
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