胃癌是我國常見的消化道惡性腫瘤之一，在世界範圍內均具有較高的發病率和致死率。由於其病情發展較快, 早期檢出率低, 出現症狀後多為中晚期, 治療效果往往較差，嚴重威脅人類健康。深入研究胃癌的發生發展機制，對指導胃癌的治療有著十分重要的臨床意義。
樁蛋白(Paxillin)是近年來發現的一種重要的細胞黏附因子,是致瘤性酪氨酸激酶的一種底物,與整合素相關聯，構成細胞與細胞外基質區域性黏附關鍵部位,調節細胞的移動和播散等功能,從而提高腫瘤細胞轉移和侵襲的能力。
血管內皮生長因子( vascular endothelial growth factor , VEGF)是一種很強的促血管生成因子,是一種高度特異的血管內皮細胞有絲分裂素，是一種糖基化分泌性多肽因子，可以促進腫瘤組織中新生血管的形成,從而有利於腫瘤的生長及進展。為了解Paxillin和VEGF在結胃癌組織中的表達及其與胃癌臨床病理特徵之間的關係,我們採用免疫組化法對胃癌組織中Paxillin和VEGF蛋白表達水平進行檢測,並探討它們與胃癌生物學行為的關係。
1、材料和方法
1.1材料 收集山西醫科大學第一臨床醫學院2009-01~2009-07期間手術切除胃癌標本55例。其中男38例，女17例，男女比例2.24：1;年齡39～81歲，平均年齡63.56±10.58歲;病理分級：腺癌49例，印戒細胞癌6例;低分化38例，中分化11例，高分化6例;PTNM分期(國際 UICC1997分期標準)：I期10例、II期13例、III期16例、IV期16例。
以上病例術前均未作放療、化療等抗腫瘤治療。從以上55例胃癌患者的胃正常切緣組織中隨機抽取20例作為對照組。所有標本均經病理證實，用10％(中性)甲醛(固定)，(石蠟)包埋，4μm厚切片。
1.2 方法 採用免疫組織化學二步法染色，第一抗體Paxillin、VEGF購自福州邁新生物技術開發有限公司;P-V6000二步法免疫組化檢測試劑、濃縮型DAB試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。切片進行高溫高壓組織抗原修復。染色步驟按試劑盒說明書進行。用已知陽性片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。
1.3 結果判斷 Paxillin、VEGF陽性表達為細胞質中出現棕黃色顆粒狀物質。每張切片5個具有代表性的高倍視野，每個視野計數100個細胞，將陽性細胞的百分率和染色強度分別計分。具體判斷標準如下：
(1)根據染色程度進行評分：無染色為0分，染色強度弱者(淡黃色或僅個別細胞呈黃至棕黃色染色)為1分，染色強度強者(呈黃至棕黃色染色)為3分，中等染色強度者(染色強度介於前兩者之間)為2分;
(2)根據著色細胞百分率進行評分：著色細胞佔計數細胞百分率<5％為0分，5～25％為1分，26～50％為2分，51％～75％為3分，>75％為4分。(1)+(2)為總積分，總分為0～7分。得0分為陰性(-)，得1～2分為弱陽性(+)，得3～5分為陽性(++)，得6～7分為強陽性(+++)。
1.4統計所有資料均採用SPSS17.0統計軟體包進行分析。定性資料比較採用χ2檢驗、Fisher確切概率法。
2、結果
2.1 胃癌組織及正常切緣組織中Paxillin的表達
Paxillin蛋白的陽性表達為細胞質中出現黃色顆粒狀物質，主要定位於細胞質中。在55例胃癌組織中有37例為陽性，陽性率為67.27％，其中強陽性5例，陽性13例，弱陽性19例，18例為陰性。在20例正常胃切緣組織中，有4例陽性表達，其中強陽性1例，陽性1例，弱陽性2例，陽性率20.00％。胃癌組織中Paxillin蛋白的表達明顯高於正常切緣組，差異具有顯著性(P<0.01)。
2.2 胃癌組織及正常切緣組織中VEGF的表達
VEGF的陽性表達為細胞質中出現黃色顆粒狀物質，主要定位於細胞質中。在55例胃癌組織中有40例為陽性，陽性率為72.72％，其中強陽性5例，陽性13例，弱陽性22例，15例為陰性。在20例正常胃切緣組織中，有7例陽性表達，其中強陽性1例，陽性2例，弱陽性4例，陽性率35.00％。胃癌組織中VEGF的表達明顯高於正常切緣組，差異具有顯著性(P<0.01)。
2.3 Paxillin蛋白的表達與臨床特徵和病理引數的關係
Paxillin陽性表達與腫瘤大小、組織分化程度、胃癌浸潤深度、TNM分期、淋巴結轉移有關，各組間對比差異均有顯著性(P<0.05),而與性別、年齡無關。VEGF陽性表達與組織分化程度、胃癌浸潤深度、TNM分期、淋巴結轉移有關，各組間對比差異均有顯著性(P<0.05),而與性別、年齡和腫瘤大小無關。
3、討論
細胞黏附與腫瘤的關係是近年來生命科學研究的熱門課題之一。惡性腫瘤的發生發展和轉移不僅是組織細胞的異常增殖，細胞-細胞、細胞-基質之間的特異黏附和細胞遷移過程異常也是其另一重要原因。Paxillin是近年來發現的一種訊號銜接蛋白(signal adaptor protein)，相對分子質量為68×103, 主要存在於黏附斑，構成細胞與細胞外基質區域性黏附的關鍵部位,同時也是細胞訊號傳導的重要位點。
在整合素啟用早期,出現幾種整合素聯合蛋白的酪氨酸磷酸化,其中包括Paxillin。研究表明，Paxillin有參與動態調節粘著斑、調節細胞的移動和播散等功能，由於腫瘤的浸潤轉移與細胞的黏附力、移動力的改變直接相關，所以Paxillin與腫瘤細胞的浸潤和轉移必然存在著一定的聯絡。
有相關研究報道：paxillin在胃中、低分化腺癌組織中的表達顯著高於高分化腺癌，進展期胃癌組織中顯著高於早期胃癌，胃癌原發灶中顯著高於淋巴結轉移灶。Paxillin在食管癌組織中顯著增高，且與臨床分期和淋巴結轉移有關。Paxillin在大腸癌中也有高表達,且與癌組織浸潤腸壁深度和淋巴結轉移密切相關。
在肝細胞癌患者中paxillin 的陽性率在低分化組高於高分化組，伴有門靜脈癌栓形成組高於無癌栓形成組，伴有肝外轉移組高於無肝外轉移組;在肺癌組織中，Paxillin 呈陽性表達的超過半數發生淋巴結轉移，而paxillin 呈陰性的肺癌發生淋巴結轉移者不到1/5。可見Paxillin的表達很有可能與胃癌發生發展和轉移有關，可以作為預示腫瘤浸潤轉移和患者預後不良的指標。
本次實驗研究顯示:Paxillin蛋白在胃癌組織中高表達與正常胃切緣組織對比差異有顯著性(P<0.01)。Paxillin陽性表達與腫瘤大小、組織分化程度、胃癌浸潤深度、TNM分期、淋巴結轉移有關，各組間對比差異均有顯著性(P<0.05)。由此可見，Paxillin參與了胃癌的發生和發展，是胃癌預後不良的影響因子。
血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)亦稱血管通透因子(vascular permeability factor,VPF)，是一種特異地作用於血管內皮細胞的生長因子。近年來VEGF與惡性腫瘤的關係受到重視，並開展了較多研究，發現惡性腫瘤組織VEGF表達上調，能促進腫瘤血管形成，是腫瘤產生、發展和轉移過程中極為關鍵的步驟。
豐富的腫瘤新生血管，一方面輸送氧氣、營養、轉運代謝產物滿足腫瘤組織無限生長的需要;另一方面，新生血管基底膜不完整及血管通透性的提高，也為腫瘤的浸潤、轉移提供便利條件。
有研究表明：VEGF基因在胃癌組織中有較高的表達, 且與腫瘤的浸潤深度、臨床分期及淋巴轉移具有顯著的相關性。本實驗示：VEGF在胃癌組織中呈過度表達狀態，與正常胃切緣組織的表達有顯著差異，提示它參與了胃癌的發生和發展。VEGF在胃癌組織中的表達與組織分化程度、胃癌浸潤深度、TNM分期、淋巴結轉移有關，提示它是一種胃癌預後不良的影響因子。
綜上所述，Paxillin和VEGF參與了胃癌的發生和發展，是胃癌預後不良的影響因子。並且兩者的表達均與組織分化程度、胃癌浸潤深度、TNM分期、淋巴結轉移密切相關，提示聯合檢測Paxillin和VEGF在胃癌組織中的表達，比單一指標更能夠準確的判斷預後。在有區域淋巴結轉移的病例中，Paxillin和VEGF陽性表達率明顯增高，暗示胃癌區域淋巴結轉移的危險性增高，對於胃癌手術的根治範圍和術後化療有一定的指導意義。
此外，Paxillin和VEGF在胃癌的發生發展中有相互作用。VEGF通過使Paxillin的酪氨酸磷醯化，進而增強paxillin的表達，促進腫瘤細胞的遷移和浸潤，靶向Paxillin的治療既可以阻止腫瘤的發生、發展，又可抑制腫瘤的血管生成並增加腫瘤對化療藥物的敏感性，有望成為抗腫瘤治療的重要靶點。
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