抗磷脂抗體(anti-phospholipid antibody，APA)是一族自身免疫性抗體，以抗心磷脂抗體(anticardiolipin antibody，ACA)和狼瘡抗凝物(lupus anticoagulant，LA)為主，為妊娠丟失的主要免疫因素之一。研究顯示中醫藥在免疫調節方面發揮重要作用。本研究採用動物實驗的方法，初步觀察了補腎活血方-丹壽湯對APA致孕鼠妊娠丟失的影響。河南中醫學院第一附屬醫院生殖中心衛愛武
材料與方法
1.動物 採用SPF級健康雌、雄SD大鼠各120只，10周齡，雌鼠體重200g±10g，雄鼠體重250g±20g，河南省實驗動物中心提供（合格證號0009881）。雌、雄大鼠按1：1合籠，次日清晨發現陰栓或陰道塗片發現精蟲者定為妊娠第0天，共受孕100只，作為入選實驗動物，所有SD大鼠均餵養在恆溫、恆溼的清潔環境中，環境溫度為26℃，溼度為70％，每天12h光照/黑暗。
2.藥品 補腎方（|絲子32 g，川斷16 g，桑寄生16 g，阿膠16g），活血方（丹蔘20 g，降香20 g），丹壽湯（以上兩方相合），水濃煎，按人鼠體重比換算，分別製成含生藥1g/ml、0.67g/ml 、0.34g/ml濃煎液備用。由河南中醫學院第一附屬醫院製劑室製備。
3. 人血清收集及純化
3.1血清收集的入選標準
2007年3月C9月就診於河南中醫學院第一附屬醫院的門診及病房的複發性流產患者，經ELISA檢測血ACA陽性，定量檢測為中、高度；同期在門診及病房的系統性紅斑狼瘡（SLE）患者，經單抗的狼瘡抗凝物活性檢測陽性者；健康人的血清。
3.2血清收集的排除標準
（1）ACA陽性的病人，應排除引起流產的其它原因；（2）SLE患者，應排除ACA陽性及其他抗體陽性者；（3）以上三種人群，同時均應排除合併其他各種疾病，且近期未經藥物治療者，經患者同意留取血清。
3.3提純及蛋白溶液濃度測定 經二次鹽析法蛋白液提純後，用紫外分光光度法測定蛋白質濃度，在280nm下測定溶液OD值，參照公式：蛋白質質量濃度（mg/ml）=1.2×OD280nm，求得溶液中蛋白質質量濃度[1]。配成質量濃度為15 mg/ml蛋白液（相當於75mg/(kg・d)），於-20℃分裝儲存。
4. 動物造模、分組及給藥方法 模型複製參考Holers[2]的造模方法並加以改良。將受孕鼠100只隨機分為兩組，每組50只，每組又分補腎活血組（A）、補腎組（B）、活血組（C）、模型組（D）、空白孕鼠組（E），A、B、C組自發現陰栓之日起給予丹壽湯、補腎方、活血方濃煎液，D、E組予生理鹽水，4ml/d，分2次灌胃，共15日，其間A、B、C、D組分別於孕8天、孕12天背部多部位皮下注射ACA純化蛋白液、LA純化蛋白液15mg/(ml・d)，E組則分別於孕8天、孕12天背部多部位皮下注射同量正常人血清。所有動物於孕15日處死取材。
3.觀察指標及檢查方法
3.1 鼠血ACA水平測定 於孕15天取腹主動脈取血3ml，採用酶聯免疫法檢測血清ACA水平，並用酶標儀測OD值。（ACA酶聯免疫法檢測試劑盒，深圳市賽爾生物技術有限公司生產，批號20070721）。
3.2鼠血單抗的狼瘡抗凝物活性測定 於孕15天取腹主動脈取血1.8ml，參考文獻[3] 採用終點凝集法測定活化的部分凝血酶原時間（APTT）來檢測其活性。（半自動計時儀，Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ；鼠單抗試劑盒MABTEST，Adiatec SA,Diagnositic }Biotechnologies,LA,法國, 貨號20070091）
3.3 胚胎稱重 烏垃坦麻醉後，開腹分離鼠胚胎，用精密電子天平稱溼重。
3.4胚胎吸收率的檢測 參考文獻[4-5]，計算胚胎吸收率（胚胎吸收率=被吸收胚胎個數/被吸收胚胎個數+未被吸收胚胎個數×100%）。
3.5 胎盤病理學檢測 剝離部分胎盤用4%多聚甲醛固定24-48h，常規石蠟包埋、切片（厚度4um），ACA陽性妊娠丟失模型組HE染色及SP免疫組化染色，LA陽性妊娠丟失模型組HE染色，HMLAS-2000高清晰彩色醫學圖文分析系統進行影象採集。
3.6 統計分析 運用SPSS13.0軟體進行分析，所有資料均進行方差齊性檢驗，兩組間資料均採用t檢驗。
結果
1. ACA陽性、LA陽性孕鼠不同組別胚胎吸收率、胚胎重量、ACA及LA活性比較，見表1、2。
與D組相比，（1）A、B及C組的胚胎吸收率、ACA及APTT水平均降低（P<0.01），但三組中以A組下降顯著（P<0.05），且與E組差異無統計學意義。（2）A組及C組的胚胎重量有明顯增加（P<0.01，P<0.05），且僅A組的胚胎重量與E組無統計學意義（P>0.05）。提示補腎活血方優於補腎方或活血方。
2.各組鼠胎盤組織病理學觀察 （1）免疫組化切片 E組未見褐色ACA免疫複合物沉積；ACA妊娠丟失D組鼠胎盤組織可見不同程度棕褐色ACA免疫複合物沉積，並有細胞核固縮、核碎裂現象，提示胎盤組織變性、壞死；B組、C組均較D組有明顯改善；A組未見胎盤組織變性、壞死現象。（2）HE染色病理切片 E組胎盤組織細胞排列整齊、結構清晰、血竇豐富均勻；LA、ACA妊娠丟失D組胎盤組織不同程度變性、壞死，滋養細胞層可見炎性細胞浸潤，胎盤血管內不同程度纖維素凝結及靜脈淤血，提示胎盤血液迴圈障礙；B組、C組均較模型組病理現象有明顯改善，而A組胎盤病理基本正常。
表1 ACA陽性孕鼠不同組別胚胎吸收率、胚胎重量、ACA水平變化
組別
孕鼠個數
胚胎吸收率
胚胎重量
ACA 水平OD值
A組
10
0.03±0.03＊＊
0.38±0.05＊＊
0.10±0.03＊＊
B組
10
0.12±0.08＊＊#
0.32±0.06△
0.19±0.05＊＊##△
C組
10
0.10±0.04＊＊#
0.29±0.10＊△
0.22±0.04＊＊##△
D組
10
0.21±0.09
0.23±0.04
0.32±0.05
E組
10
0
0.39±0.06
0
注：與D組比較，＊P<0.05, ＊＊P<0.01；與E組比較，△P<0.01
與A組比較，#P<0.05，##P<0.01
表2 LA陽性孕鼠不同組別胚胎吸收率、胚胎重量、LA活性比較
組別
孕鼠個數
胚胎吸收率
胚胎重量
APTT（S）
A組
10
0.01±0.03＊＊
0.42±0.03＊＊
20.03±0.78＊＊
B組
10
0.08±0.07＊＊ #
0.34±0.06△
21.40±1.11＊＊##△
C組
10
0.06±0.07＊＊ #
0.36±0.06＊△
21.31±1.18＊＊##△
D組
10
0.19±0.06
0.32±0.04
24.34±1.31
E組
10
0
0.43±0.04
19.86±0.95
注：與D組比較，＊P<0.05, ＊＊P<0.01；與E組比較，△P<0.01
與A組比較，#P<0.05，##P<0.01
討論
妊娠丟失常表現為複發性流產、死胎或胎兒宮內發育遲緩等，除外遺傳、解剖、內分泌因素，其與免疫因素有密切關係，APA為其免疫因素之一。目前，APA致妊娠丟失的確切機理尚不十分清楚，但大多傾向於血凝學說。動物實驗證實，APA阻止前列環素合成，使血栓素/前列環素比值失調，導致血液高凝、血栓，尤其以胎盤迴圈為主，可引起胎盤血栓的形成及胎盤梗死，從而造成胎盤功能減退，出現胚胎吸收、宮內發育遲緩等[6-7]。對其治療臨床主要採用阿司匹林、肝素、強的鬆等，但這些藥物潛在的副作用使患者感到恐慌。
祖國醫學有“墮胎”“滑胎”“胎萎不長”“子死腹中”的病名，類似現代醫學之妊娠丟失的表現。中醫認為，以上疾病由衝任損傷所致。衝任隸屬於腎，且腎主生殖，任主胞胎，故腎虛無力系胞為病之本。然若腎陽虛失卻溫煦，或陰虛生熱，熱灼精血致血滯不行或屢墮衝任損傷，瘀血阻絡，致胎失所養，為病之標。《內經》“四烏賊骨一茹丸”打開了補腎活血法的先河，更有張錫純指出“腎氣丸為補腎之藥，實兼為開瘀之藥”，認為補腎與活血藥有機的結合具有相互促進的作用。基於此建立補腎活血安胎的原則，並擬定補腎活血方-丹壽湯，方以壽胎丸加丹蔘、降香組成。方中|絲子、丹蔘為君，補活結合，相得益彰；臣以寄生、續斷益腎安胎，增加固護衝任之功，佐以降香助丹蔘活血行血，阿膠補血止血，以血養胎，並防活血化瘀之藥散血之慮，一補一行，標本皆治，共奏精血生、氣血行而安胎之效。現代研究也顯示，|絲子能促進卵巢黃體激素的增加，增強體液免疫功能，並有類似雌激素樣作用，能抑制免疫球蛋白的產生；桑寄生及續斷均含有豐富的甾醇和甾酮，有利於子宮和胚胎的發育及抑制子宮收縮的作用；阿膠含多種微量元素，能提高巨噬細胞的資贍芰Γ壞げ巍⒔迪隳芙檔兔饗願納頗讜嗉巴庵芪⒀罰種頗鑰寡ǖ男緯桑鑾棵庖擼俳逡好庖叻從[8]。本研究結果顯示，補腎活血方較單純補腎方、活血方更能有效地降低APA滴度，從而改善胎盤微迴圈，降低胚胎吸收率，增加鼠胚胎重量，提高再次妊娠的成功率。
參考文獻：
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Wang Zaimo,Fu Rongzhou,Tang Zhangquan.Modern Chinese Traditional Medicine Clinical Apply. Beijing :People’s Medical Punishing House, 2005：259-396(自譯)
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