秦亮 何朝巨集 任君凱 楊鐵軍 馮超傑 李靖 趙鵬程 馬靜 李晶磊
前列腺癌是男性中常見的腫瘤，在歐美國家發病率最高，發病率已超過肺癌，病死率僅次於肺癌。我國近年來前列腺癌發病率日趨上升 ，成為威脅男性健康的一個主要因素。目前，前列腺癌的早期診斷主要是通過前列腺特異性抗原（prostate specific antigen,PSA）篩查結合直腸指檢（Digital rectal examination,DRE）。PSA的發現對於前列腺癌的早期診斷具有里程碑的意義。但PSA只具有前列腺組織特異性，而不具備前列腺腫瘤特異性。大量研究表明早期前列腺癌抗原(early prostate cancer antigen,EPCA)免疫組化染色尤其是血清EPCA的ELISA法檢測顯示出很好的特異性和靈敏度，如果能將EPCA與PSA篩查聯合應用，勢必能降低不必要的前列腺穿刺活檢數和減少漏診率，EPCA有可能將成為篩查和診斷前列腺癌新的特異性標記物。河南省腫瘤醫院泌尿外科何朝巨集
1.材料與方法
1.1 組織標本的收集
前列腺癌（Pca）標本41例，年齡54～86歲(66.4±8.5歲)，9例來自經尿道前列腺電切術切除標本、32例為經直腸超聲引導下前列腺系統性穿刺活檢獲得標本，經病理證實為前列腺癌(均為腺癌)，均無激素和外科去勢及放射治療。良性前列腺增生(BPH)組織標本34例，年齡55～71歲(62.7±5.6歲), 標本是由經尿道前列腺電切術及恥骨上前列腺摘除術獲得；5例正常對照組來自根治性膀胱全切術切除的前列腺組織標本。良性前列腺增生(BPH)組織與正常前列腺（NP）組織標本均經病理證實。標本於手術切除及直腸穿刺活檢後15 min內置於-80℃冰箱中儲存。
1.2 血液標本的收集
為儘量減少可能影響血清EPCA及PSA水平的因素，故在樣本的納入時按以下標準進行收集：①入院前未進行前列腺按摩、經直腸前列腺超聲檢查、前列腺穿刺活檢及膀胱鏡檢查；②入院前無急、慢性前列腺炎；③因急性尿瀦留入院的患者也排除在外。
1.3實驗方法
1.3.1 組織mRNA的提取
組織標本於手術切除及經直腸B超引導下前列腺系統性穿刺活檢後15 min內置於-80℃冰箱中儲存，並經病理檢查證實後進行總RNA提取。
1.3.2 逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)分析
用逆轉錄酶MMLV合成第一鏈。根據北京全式金生物技術有限公司提供的使用說明書進行。
1.3.3 瓊脂糖凝膠電泳
取5ul擴增產物與緩衝液混合後加入瓊脂糖凝膠的加樣孔中，進行電泳。電泳條件為2％瓊脂糖凝膠，電壓4～10v/cm。EB染色，在紫外線投射儀下觀察電泳條帶，電泳條帶採用D-140影象記錄分析系統進行分析。
1.3.4 ELISA法檢測血清EPCA水平
本實驗所使用的人（Human）早期前列腺癌抗原（EPCA）檢測試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）。已知EPCA濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。
2.結果
2.1 RT-PCR反應結果
經過凝膠成像系統觀察RT-PCR反應產物，所有反轉錄cDNA以GAPDH
引物進行PCR擴增均得到138bp的目的片段，以EPCA基因引物進行PCR擴增，其中前列腺癌組織41份樣本中有34例得到411bp大小片段(如圖3、4)，表示EPCA mRNA在組織內有表達；前列腺增生症及正常前列腺組織樣本中均為陰性(如圖3、4)。EPCA mRNA在前列腺癌組織中有82.9%的陽性表達率。結果表明EPCA mRNA在前列腺癌組織中特異性表達。
圖1 前列腺癌、前列腺增生PCR產物電泳圖
圖2 前列腺癌、前列腺增生及正常前列腺組織PCR產物電泳圖
2.2 前列腺癌、偶發前列腺癌、BPH及健康對照組的血清EPCA值
31例PCa組、9例IPCa組、181例BPH組及26例健康對照組的術前血清EPCA水平，以及與血清EPCA相關性的各種臨床病理特徵、相關分組的術前血清EPCA水平，和相關各組之間比較的P值見下表。
表1 PCa、IPCa、BPH及健康對照組的血清EPCA值；相關各組之間比較的P值
特徵
例數
均數±標準差
中位數
範圍
P值
EPCA （ ng/ml ）
臨床研究物件
247
7.07±6.98
4.76
0.28～32.46
PCa
31
19.35±7.86
21.11
7.89～32.46
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